In fluoreszensfilter is in essensjele komponint yn fluoreszensmikroskoop.In typysk systeem hat trije basisfilters: in excitaasjefilter, in emisjefilter en in dichroyske spegel.Se wurde gewoanwei yn in kubus ferpakt, sadat de groep tegearre yn 'e mikroskoop ynfoege wurdt.
Hoe wurket in fluorescensfilter?
Excitation Filter
Eksitaasjefilters stjoere ljocht fan in spesifike golflingte troch en blokkearje oare golflingten.Se kinne brûkt wurde om ferskate kleuren te produsearjen troch it filter yn te stellen om mar ien kleur troch te litten.De excitaasjefilters komme yn twa haadtypen - lange passfilters en bandpassfilters.De exciter is meastentiids in bandpassfilter dat allinich de golflingten trochgiet dy't opnommen binne troch de fluorofoor, sadat de excitaasje fan oare boarnen fan fluoreszinsje minimearret en it excitaasjeljocht yn 'e fluorescence-emisjebân blokkearret.As oanjûn troch de blauwe line yn 'e figuer, is BP 460-495, wat betsjut dat it allinich troch de fluoreszinsje fan 460-495nm kin passe.
It wurdt pleatst binnen it ferljochtingspaad fan in fluoreszensmikroskoop en filteret alle golflingten fan 'e ljochtboarne út, útsein it fluorofoor-eksitaasjeberik.De minimale filtertransmission diktearret de helderheid en glâns fan ôfbyldings.In minimum fan 40% oerdracht foar elk excitaasjefilter wurdt oanrikkemandearre sadat de oerdracht ideaal is> 85%.De bânbreedte fan it excitaasjefilter moat folslein binnen it fluorofoor-eksitaasjeberik wêze, sadat de sintrale golflingte (CWL) fan it filter sa ticht mooglik is by de peak-eksitaasjegolflingte fan 'e fluorofoor.De excitation filter optyske tichtheid (OD) dictates de eftergrûn ôfbylding tsjusternis;OD is in maat foar hoe goed in filter de golflingten blokkearret bûten it oerdrachtberik as bânbreedte.In minimum OD fan 3.0 wurdt oanrikkemandearre, mar in OD fan 6.0 of heger is ideaal.
Emission Filter
Emisjefilters tsjinje it doel om de winske fluoreszinsje fan 'e stekproef de detektor te berikken.Se blokkearje koartere golflingten en hawwe hege transmissie foar langere golflingten.It filter type wurdt ek assosjearre mei in nûmer, bygelyks BA510IF yn de figuer (ynterferinsje barriêre filter), dat oantsjutting ferwiist nei de golflingte op 50% fan syn maksimale oerdracht.
Deselde oanbefellings foar excitaasjefilters jilde foar emisjefilters: minimale oerdracht, bânbreedte, OD en CWL.In emisjefilter mei de ideale CWL, minimale oerdracht en OD-kombinaasje leveret de helderste mooglike ôfbyldings, mei de djipste mooglike blokkearjen, en soarget foar de deteksje fan 'e swakste emisje-sinjalen.
Dichroic Mirror
De dichroyske spegel wurdt pleatst tusken it excitaasjefilter en it emisjefilter yn in hoeke fan 45 ° en reflektearret it excitaasjesinjaal nei de fluorofoor, wylst it emisjesinjaal nei de detektor ferstjoert.Ideale dichroyske filters en beamsplitters hawwe skerpe oergongen tusken maksimale refleksje en maksimale oerdracht, mei in >95% refleksje foar de bânbreedte fan it excitaasjefilter en in oerdracht fan >90% foar de bânbreedte fan it emisjefilter.Selektearje it filter mei de krusinggolflingte (λ) fan 'e fluorofoor yn gedachten, om strie-ljocht te minimalisearjen en de fluorescerende ôfbyldingsinjaal-oan-lûdferhâlding te maksimalisearjen.
De dichroyske spegel yn dizze figuer is de DM505, sa neamd om't 505 nanometer de golflingte is by 50% fan 'e maksimale oerdracht foar dizze spegel.De oerdrachtkromme foar dizze spegel toant hege oerdracht boppe 505 nm, in steile drip yn oerdracht nei lofts fan 505 nanometer, en maksimale refleksje oan 'e lofterkant fan 505 nanometer, mar kin noch wat oerdracht ûnder 505 nm hawwe.
Wat is it ferskil tusken lange pass- en bandpassfilters?
Fluorescence filters kinne wurde ferdield yn twa soarten: lange pass (LP) en band pass (BP).
Lange passfilters stjoere lange golflingten oer en blokkearje de koartere.De besunige golflingte is de wearde by 50% fan peaktransmission, en alle golflingten boppe de besuniging wurde oerbrocht troch de lange passfilters.Se wurde faak brûkt yn dichroyske spegels en emisjefilters.Langpassfilters moatte brûkt wurde as de applikaasje maksimale útstjitkolleksje fereasket en as spektrale diskriminaasje net winsklik of needsaaklik is, wat oer it algemien it gefal is foar probes dy't in inkele emittearjende soarte generearje yn eksimplaren mei relatyf lege nivo's fan eftergrûn autofluorescence.
Band pass filters stjoere allinnich in bepaalde golflingte band, en blokkearje oaren.Se ferminderje crosstalk troch allinich it sterkste diel fan it fluorofoor-emisjespektrum troch te litten, ferminderje autofluorescenslûd en ferbetterje sadwaande de sinjaal-to-lûd-ferhâlding yn autofluorescensmonsters mei hege eftergrûn, dy't lange passfilters net kinne biede.
Hoefolle soarten fluorescensfiltersets kinne BestScope leverje?
Guon mienskiplike soarten filters omfetsje blau, grien en ultraviolet filters.Lykas werjûn yn 'e tabel.
| Filterset | Excitation Filter | Dichroic Mirror | Barriêrefilter | LED lamp Wave Lengte | Oanfraach |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: Fluorescent antibody metoade · Acidine oranje: DNA, RNA · Auramine: tuberkelbacil ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: Fluorescent antibody metoade · Propidiumjodide: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Auto-fluorescence observaasje · DAPI: DNA kleuring · Hoechest 332528, 33342: brûkt foar chromosoomkleuring |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Katecholaminen · 5-hydroxy tryptamine ·Tetracycline: skelet, tosken |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Filtersets dy't wurde brûkt yn fluorescinsje-oanwinsten binne ûntworpen om 'e grutte golflingten dy't brûkt wurde yn fluorescinsje-applikaasjes, dy't basearre binne op 'e meast brûkte fluorofoaren.Om dizze reden wurde se ek neamd nei de fluorofoor dy't se bedoeld binne foar ôfbylding, lykas DAPI (blau), FITC (grien) of TRITC (read) filterkubussen.
| Filterset | Excitation Filter | Dichroic Mirror | Barriêrefilter | LED lamp Wave Lengte |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Hoe kinne jo in fluoreszensfilter kieze?
1. It prinsipe fan it selektearjen fan fluoreszensfilter is om it fluoreszinsje-/emisjeljocht sa fier mooglik troch it byldende ein troch te litten, en tagelyk it eksitaasjeljocht folslein blokkearje, sadat de heechste sinjaal-oan-lûdferhâlding te krijen is.Benammen foar it tapassen fan multiphoton-eksitaasje en totale ynterne refleksjemikroskoop sil it swakke lûd ek grutte ynterferinsje feroarsaakje foar it ôfbyldingseffekt, sadat de eask foar sinjaal-oan-lûdferhâlding heger is.
2. Kennis it eksitaasje- en emisjespektrum fan 'e fluorofoor.Om in fluorescensfilterset te konstruearjen dy't in hege kwaliteit, hege kontrastôfbylding mei in swarte eftergrûn genereart, moatte excitaasje- en emisjefilters hege transmissie berikke mei minimale passbânrimpel oer de regio's dy't oerienkomme mei de fluorophore excitation peaks of emissies.
3. Tink oan de duorsumens fan fluorescence filters.Dizze filters moatte ûntrochsichtich wêze foar yntinsive ljochtboarnen dy't ultraviolet (UV) ljocht generearje dat kin liede ta "burnout", benammen fan it exciterfilter, om't it wurdt ûnderwurpen oan de folsleine yntinsiteit fan 'e ferljochtingsboarne.
De ferskillende Fluorescent Sample Images
De middels wurde sammele en organisearre op it ynternet, en wurde allinnich brûkt foar learen en kommunikaasje.As d'r in ynbreuk is, nim dan kontakt mei ús op om te wiskjen.
Post tiid: Dec-09-2022